Sự phát hiện herpesvirus 8 ở người bằng phản ứng chuỗi polymerase định lượng: phát triển và chuẩn hóa các phương pháp
Vấn đề nghiên cứu: Herpesvirus 8 ở người (HHV-8), tác nhân gây rau sarcom Kaposi (KS), bệnh Castleman đa trung tâm (MCD), và u lymphoma tràn dịch nguyên phát (PEL) hiếm gặp ở Úc, nhưng bệnh lưu hành ở cận sa mạc sahara châu Phi, nhiều nơi ở Đông Nam Á và châu Đại Dương. Trong khi điều trị các thương tổn KS mặt ngoài cơ thể có thể được giám sát bằng quan sát lâm sàng, các tổn thương KS bên trong cơ thể, MCD và PEL cần đến các chẩn đoán hình ảnh bên trong và đắt tiền, hoặc tử thiết. Ở các bệnh nhân mắc MCD và PEL, nếu virus huyết của HHV-8 không được giảm nhanh, ~ 50% bệnh nhân chết trong vòng 24 tháng. HHV-8 qPCR là một công cụ có giá trị đối với việc giám sát virus huyết của HHV-8, nhưng chưa có sẵn ở nhiều nơi trên thế giới, gồm những nơi với tỷ lệ hiện mắc cao của KS và HHV-8.
Phương pháp: Một phương tiện phân tử mới với dòng công việc 3 giai đoạn chặt chẽ đã được thiết lập, gắn liền với các hướng dẫn NPAAC và CLSI. Ba thử nghiệm định lượng đảm bảo giá trị đầy đủ đã được phát triển: hai thử nghiệm đối với việc phát hiện và việc định lượng HHV-8; một thử nghiệm đối với GAPDH, cần thiết cho sự bình thường hóa tải lượng virus trong mô và trong máu ngoại vi.
Kết quả: Thử nghiệm HHV-8 ORF73 và ORF26 qPCR độ đặc hiệu là 100%. Tất cả các thử nghiệm qPCR, đã được trình bày một biên độ động học rộng (102 đến 1010 copies/muL môi trường đệm TE) với một giới hạn phát hiện 4,85 x 103, 5,61 x 102, và 2,59 x 102 copies/muL môi trường đệm TE và một giới hạn định lượng 4,85 x 103, 3,01 x 102, và 1,38 x 102 copies/muL môi trường đệm TE, tương ứng đối với HHV-8 ORF73, HHV-8 ORF26, và GAPDH. Các thử nghiệm được kiểm định trên một bảng 35 mẫu sinh thiết KS từ Queensland. Toàn bộ là HHV-8 qPCR (+) với tải lượng virus trung bình là 2,96 x 105 HHV-8 copies/muL DNA extract (biên độ: 4,37 x 103 đến 1,47 x 106 copies/muL DNA extract): Khi được bình thường hóa những cái bằng nhau này với một tải lượng virus trung bình 2,44 x 104 HHV-8 copies/103 tế bào (biên độ: 2,20 x 102 đến 7,38 x 105 HHV-8 copies/103 tế bào).
Kết luận: Những kết quả đầu tiên này hoàn toàn lạc quan, đã đảm bảo giá trị và các thử nghiệm MIQE tuân theo HHV-8 qPCR đã được thiết lập tại Úc. Chúng đã hoạt động tốt đối với việc phát hiện về chất của HHV-8 trong mô lưu trử, và là thích hợp đối với việc phát hiện về lượng trong máu toàn phần. Bây giờ chúng sẵn có để nghiên cứu, đối với chẩn đoán lâm sàng về nhiễm HHV-8, và để giám sát hiệu lực điều trị.
Tài liệu tham khảo
Speicher DJ, Johnson NW. Detection of human herpesvirus 8 by quantitative polymerase chain reaction: development and standardisation of methods. BMC Infectious Diseases 12 (1), 210 (Sep 2012)
Bs Phan Quận – Văn Phòng Hội Truyền Nhiễm Việt Nam
